الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC)
تقنية متطورة في الكيمياء التحليلية تُستخدم لـ فصل، تحديد وقياس كل مكوّن في الخليط بدقة عالية.
آلية العمل:
في جهاز HPLC يوجد:
طور متحرك يُدفع عبر النظام بواسطة مضخة.
طور ثابت موجود في عمود داخل فرن بدرجة حرارة مضبوطة.
إدخال العينة:
تلقائياً عبر Auto Sampler
أو يدوياً باستخدام محقنة
بعد مرور العينة في العمود، يقوم الكاشف (Detector) بقياس المكونات المنفصلة.
المضخة تدفع الطور المتحرك تحت ضغط عالٍ، مع استخدام مضخة تفريغ وجهاز لإزالة الغازات.
طرق الإذابة (Elution):
الوضع المتساوي Isocratic: الطور المتحرك ثابت طوال التحليل.
الوضع المتدرج Gradient: تركيب الطور المتحرك يتغير أثناء الفصل.
أساس الفصل:
المركبات التي تميل أكثر للطور المتحرك
تخرج أسرع.
المركبات التي تميل أكثر للطور الثابت
تتحرك أبطأ وتخرج لاحقاً.
أنواع HPLC:
الطور العكسي (Reverse Phase): الطور الثابت غير قطبي، الطور المتحرك قطبي. السيليكا المعدلة بـ C18 أو C8 شائعة الاستخدام.
الطور العادي (Normal Phase): الطور الثابت قطبي، الطور المتحرك غير قطبي.
الكواشف (Detectors):
من أهمها كاشف UV-Vis الذي يُسجل طيف الامتصاص في مناطق فوق البنفسجية والمرئية.
مصباح ديوتيريوم للـ UV
مصباح تنغستن للمرئي
عرض النتائج:
المحور X يمثل زمن الاحتجاز (Retention Time).
المحور Y يمثل كمية المركب.
عدد القمم يكشف عدد المكونات في العينة.